Bonjour,
Je suis enseignante de SVT, en charge de l'option culture in vitro pour des élèves en Bac pro horticulture.
Voici plusieurs questions un peu pratiques pour lesquelles je ne trouve pas de réponse claire.
1) Combien de temps peut-on attendre avant de passer les milieux de culture à l'autoclave ?
En les laissant à température ambiante, au frigidaire ?
En effet, je n'ai pas toujours le temps de stériliser directement les milieux après leur fabrication. Et le frigidaire du laboratoire n'est pas immense et déjà bien plein. Du coup le problème de conservation se pose.
2) Combien de temps se gardent les éléments ? Il s'agit de poudres Sigma pour la plupart, et dont je n'ai pas de date d'ouverture.
3) Que faut-il penser de la stérilisation au micro-onde ? J'ai vu que ça se faisait et c'est tout de même plus rapide que l'autoclave.
4) Stérilisation des instruments : vaut-il mieux les passer à l'étuve dans un papier alu ou les faire tremper dans l'alcool ?
5) Est-ce que je peux utiliser des tubes à essai avec bouchons en plastique ? Ou il vaut mieux mettre du coton cardé et du papier alu ?
Voilà pour un début, à étoffer en fonction de vos réponses.
D'avance merci.
Bénédicte MICHEL
Une réponse
Voici les réponses apportées par une collègue pratiquant régulièrement des cultures in-vitro:
1) Combien de temps peut-on attendre avant de passer les milieux de culture à l’autoclave ?
Généralement, on autoclave dans la même journée que la préparation car il y a des sucres dans le milieu de culture, propices au développement microbien. Sinon, conserver au frigo pour autoclaver le lendemain.
2) Combien de temps se gardent les éléments ?
Au moins une année sinon plus. A garder à température de la pièce (15-25°C), à l’abri de la lumière et de l’humidité.
3) Que faut-il penser de la stérilisation au micro-onde ?
Je n’ai pas d’expérience sur la stérilisation au four micro-ondes. Par contre, une cocotte minute peut suffire pour stériliser des tubes ou bocaux : 20 mn sous pression sont suffisantes.
4) Stérilisation des instruments
L’alcool ne suffit pas, il faut flamber les instruments ensuite puis laisser refroidir, ce qui est dangereux en classe. Il existe aussi des bains chauffants électriques à billes de verre que l’on place sous la hotte à flux laminaire. On place régulièrement les instruments dans les billes de verre pour stérilisation puis on laisse refroidir en condition stérile avant usage.
Sinon, stérilisation à l’étuve à 180°C/2h dans un papier d’aluminium.
5) Est-ce que je peux utiliser des tubes à essai avec bouchons en plastique ?
Cela dépend du plastique des bouchons : il faut un plastique qui ne fonde pas au-dela de 120°C en autoclave ou 180°C en étuve.
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